上期文章我們深入探討了熱原與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)從取樣到處理的詳盡流程，本期文章繼續(xù)揭開(kāi)質(zhì)量控制領(lǐng)域的神秘面紗。第二期將聚焦于檢測(cè)方法的靈活性探討、轉(zhuǎn)換流程的優(yōu)化策略，以及細(xì)菌內(nèi)毒素限值設(shè)定的最新動(dòng)態(tài)，為您呈現(xiàn)更多關(guān)于這一關(guān)鍵質(zhì)量控制環(huán)節(jié)的深度解析。

Q1：對(duì)于藥典收載的產(chǎn)品，制藥公司是否可以采用替代測(cè)試方法？

可以。如果制藥公司提供方法的準(zhǔn)確度、靈敏度、精密度、選擇性或者適用性，在自動(dòng)化或者計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)簡(jiǎn)化、和其他特殊環(huán)境下具有優(yōu)勢(shì)，制藥公司可以采用替代方法或者規(guī)程。這樣的替代方法或者規(guī)程應(yīng)該根據(jù)USP通則<1225>“藥典方法驗(yàn)證"的要求來(lái)驗(yàn)證，并且應(yīng)該證實(shí)具有等效效果或者更好的分析效果。在出現(xiàn)差異或爭(zhēng)議時(shí)，除非在藥品專(zhuān)論中另有說(shuō)明，否則最終結(jié)論應(yīng)該基于USP藥典凝膠法來(lái)得出。

下面是替代測(cè)試的例子。

1. 單核細(xì)胞激活類(lèi)型熱原測(cè)試

有必要進(jìn)行產(chǎn)品專(zhuān)屬性驗(yàn)證以確認(rèn)特定測(cè)試物質(zhì)或物料是否適用于單核細(xì)胞激活方法是合適的。驗(yàn)證應(yīng)該包括，但是不限于干擾測(cè)試、單個(gè)測(cè)試樣品的熱原準(zhǔn)確度測(cè)試；對(duì)于醫(yī)療器械，測(cè)試系統(tǒng)和單核細(xì)胞直接相關(guān)的能力。

2. 使用重組試劑的細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試

在2024年7月26日，美國(guó)藥典（USP）微生物專(zhuān)家委員會(huì)正式宣布，將第<86>章“使用重組試劑的細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試"納入《美國(guó)藥典-國(guó)家處方集》（USP-NF）。該章節(jié)的最終文本預(yù)計(jì)將于2024年11月公布，以供行業(yè)提前采用，并定于2025年5月正式生效。

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Q2：當(dāng)從一種細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試轉(zhuǎn)換為另外一種方法時(shí)，最-好-的流程是什么?

測(cè)試相同實(shí)體（例如LAL系列）的測(cè)試方法的轉(zhuǎn)換可以通過(guò)比較這2種測(cè)試方法來(lái)證實(shí)新方法的等效性?；A(chǔ)工作是比較檢測(cè)限度和抑制/增強(qiáng)能力。新方法的靈敏度可以通過(guò)加入產(chǎn)品樣品來(lái)評(píng)估。另外在使用插標(biāo)法時(shí)，一連串的產(chǎn)品局部樣品被發(fā)現(xiàn)顯示陽(yáng)性可能對(duì)于比較這個(gè)方法的結(jié)果來(lái)說(shuō)是好的源頭。分析方法驗(yàn)證應(yīng)該試圖說(shuō)明方法正常使用中和制造環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的變異性（例如原始物料或者季節(jié)變化）。

對(duì)于藥品，獸藥和生物制品而言，應(yīng)該在PAS（優(yōu)先批準(zhǔn)補(bǔ)充）中遞交新方法的轉(zhuǎn)換資料?；蛘?，若公司已建立方法轉(zhuǎn)換的一般規(guī)程，也可選擇通過(guò)PAS-CP（比較方案）提交資料以供審核。比較方案應(yīng)該詳細(xì)描述用于建立新方法等效性方法使用的檢測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)。比較方案批準(zhǔn)后，方案實(shí)施結(jié)果可按減少的報(bào)告類(lèi)別的程序直接報(bào)告（補(bǔ)充-正在實(shí)施的變更或年度報(bào)告或特別報(bào)告21 CFR 314.80）。公司應(yīng)該保存研究方案、最終報(bào)告和所有數(shù)據(jù)以便FDA審核。在遞交比較方案之前，公司應(yīng)與正確的審查部門(mén)確認(rèn)申報(bào)流程。

對(duì)于3類(lèi)醫(yī)療器械，過(guò)渡到新的檢測(cè)方法需要根據(jù) 21CFR 814.39（e）提交30天的通知。具體要求參見(jiàn)FDA's guidance,Modifications to Devices Subject to Premarket Approval （PMA）-The PMA Supplement Decision-Making Process.

對(duì)于1類(lèi)和2類(lèi)醫(yī)療器械的制造變更，應(yīng)該根據(jù)質(zhì)量體系法規(guī)和21 CFR 820進(jìn)行。設(shè)計(jì)控制、生產(chǎn)和過(guò)程控制要求見(jiàn)21 CFR 820.30、21CFR 820.70、21 CFR 820.72 和21 CFR 820.75。

對(duì)于醫(yī)療器械的質(zhì)量控制測(cè)試，包括入廠(chǎng)部件、原材料、中間產(chǎn)品、成品以及非無(wú)菌樣品滅菌前的最終產(chǎn)品熱原測(cè)試，則需要提前30天通知。醫(yī)療器械制造商應(yīng)證明其靈敏度與器械的給藥途徑和身體接觸類(lèi)型相一致。在證明方法與USP參考標(biāo)準(zhǔn)之間具有可重復(fù)的相關(guān)性后，制造商可以使用另一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法。

Q3：1987指南中附錄E中細(xì)菌內(nèi)毒素限值發(fā)生了什么變化?

自1987 年《指南》發(fā)布以來(lái)，由于劑量和藥品規(guī)格的大量增加，細(xì)菌內(nèi)毒素限值表已經(jīng)過(guò)時(shí)。確定細(xì)菌內(nèi)毒素限值的適當(dāng)方法是使用USP或AAMI標(biāo)準(zhǔn)中提供的計(jì)算方法。藥典各論中的限值也可能沒(méi)有考慮到當(dāng)前的產(chǎn)品規(guī)格或者劑量，也應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)中建議的計(jì)算方法對(duì)其進(jìn)行檢查。

如果成品中含有多種成分，則無(wú)論單個(gè)成分的細(xì)菌內(nèi)毒素限值如何，腸外給藥產(chǎn)品的總細(xì)菌內(nèi)毒素限值不應(yīng)超過(guò)USP<85>細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試中規(guī)定的總限值。鞘內(nèi)給藥產(chǎn)品、眼藥產(chǎn)品或醫(yī)療器械（有關(guān)器械，請(qǐng)參閱問(wèn)題11）的細(xì)菌內(nèi)毒素限值要求可能不以腸外給藥產(chǎn)品的計(jì)算方法為基礎(chǔ)。FDA建議企業(yè)向有關(guān)辦公室或?qū)彶椴块T(mén)來(lái)核實(shí)討論這些產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素。

Q4：如何采用QbD概念支持細(xì)菌內(nèi)毒素限值?

當(dāng)實(shí)施QbD（Quality by Design）“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)"概念時(shí)，細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試的策略應(yīng)該基于產(chǎn)品和工藝?yán)斫?，并結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)管理來(lái)確保最終產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定如一。應(yīng)該采用恰當(dāng)?shù)闹锌販y(cè)試來(lái)評(píng)估可能受到細(xì)菌內(nèi)毒素形成或者侵入風(fēng)險(xiǎn)的生產(chǎn)過(guò)程區(qū)域，很多公司已經(jīng)具備相關(guān)項(xiàng)目來(lái)監(jiān)控購(gòu)入的物料和組分,包括工藝用水的細(xì)菌內(nèi)毒素污染。

當(dāng)確定每個(gè)制造階段中控測(cè)試限值時(shí)，應(yīng)該考慮最終成品的放行標(biāo)準(zhǔn)。為了評(píng)估產(chǎn)品污染的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)，定量檢測(cè)可能優(yōu)于限值檢測(cè)，以促進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量趨勢(shì)，并在細(xì)菌內(nèi)毒素超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)和導(dǎo)致產(chǎn)品不合格之前發(fā)現(xiàn)和糾正偏離情況。

細(xì)菌內(nèi)毒素限值應(yīng)視具體情況而定，并將作為每份相關(guān)上市申請(qǐng)或補(bǔ)充材料的一部分進(jìn)行評(píng)估。

無(wú)論是替代測(cè)試方法的驗(yàn)證、檢測(cè)方法的轉(zhuǎn)換流程，還是內(nèi)毒素限值的科學(xué)設(shè)定，都離不開(kāi)對(duì)產(chǎn)品特性和工藝流程的深刻理解。這一系列的探討不僅加深了我們對(duì)熱原與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的理解，更為制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供了寶貴的實(shí)踐指導(dǎo)。更多前沿知識(shí)、最新法規(guī)解讀及案例分析將在后續(xù)文章中逐一呈現(xiàn)，敬請(qǐng)期待后續(xù)精彩內(nèi)容！